Amwnin

Cafodd CRF ei ynysu a'i buro i ddechrau o hypothalamws defaid gan wyddonwyr y Fro a gwyddonwyr eraill ym 1981. Ei ddilyniant asid amino yw:
H{0}}Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr{{-Thr{{{0} 11}}Phe-Ei-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu{20}}Met{21} }}Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala- Ei-Gwasanaeth-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH2
Mae'r dilyniant hwn yn cynnwys 41 o asidau amino gyda phwysau moleciwlaidd o tua 4.7 kDa, gyda serine (Ser) yn y terminws N- ac addasiad amidiad alanine (Ala) ar derfynell C{{{}}. Mae'r homoleg asid amino rhwng CRF defaid a CRF dynol yn 95%, gyda gwahaniaethau yn unig ar safleoedd 7, 10, 13, 16, 21, 23, 26, 28, 31, 34, a 38, ond mae'r swyddogaethau'n cael eu cadw'n fawr.

Mae CRF (Ovine) Trifluoroacetate (rhif CAS: 79804-71-0) yn gyfansoddyn halen a ffurfiwyd trwy gyfuno diwedd carboxyl CRF ag asid trifluoroacetig (TFA). Mae manteision addasu TFA yn cynnwys:

Hydoddedd gwell: Gall y grŵp asidig cryf (- COCF ∝) o TFA gynyddu hydoddedd peptidau mewn toddyddion organig, gan hwyluso gweithrediadau arbrofol.
Strwythur peptid sefydlog: Mae TFA yn lleihau agregu a diraddio peptidau trwy ffurfio pontydd halen, gan ymestyn hanner-oes.
Cynnal gweithgaredd biolegol: Gall CRF wedi'i addasu ddal i rwymo'n effeithlon i dderbynnydd CRF (CRFR), gan gadw nodweddion swyddogaethol moleciwlau naturiol.

Mae Trifluoroacetate CRF (Ovine) fel arfer yn cael ei baratoi gan synthesis peptid cyfnod solet (SPPS), lle mae'r cadwyni ochr asid amino yn cael eu hamddiffyn gan grwpiau amddiffyn Fmoc neu Boc, wedi'u cyplysu'n raddol i ffurfio cadwyn polypeptid llinol, ac yn olaf wedi'i dorri gan resin TFA a'i buro. Mae safonau rheoli ansawdd yn cynnwys:

Purdeb: Mae cromatograffaeth hylif perfformiad uchel (HPLC) yn canfod purdeb o Fwy na neu'n hafal i 98%.
Gwirio pwysau moleciwlaidd: Mae sbectrometreg màs (MS) yn cadarnhau bod y pwysau moleciwlaidd yn gyson â'r gwerth damcaniaethol.
Assay gweithgaredd biolegol: Gwirio ei allu i ysgogi secretion hormon adrenocorticotropic (ACTH) trwy arbrofion celloedd in vitro (fel celloedd tiwmor pituitary AtT-20).

Mae'r derbynnydd CRF yn perthyn i deulu derbynnydd cyplydd protein dosbarth G (GPCR) B-, sy'n cynnwys dau isdeip: CRF ₁ R a CRF ₂ R
CRF ₁ R: Wedi'i ddosbarthu'n eang yn y system nerfol ganolog (fel cortex cerebral, hippocampus, amygdala) a meinweoedd ymylol (fel chwarren bitwidol, chwarren adrenal, brych).
CRF ₂ R: a fynegir yn bennaf yng nghnewyllyn paraventricular yr hypothalamws, locws coeruleus, llinyn asgwrn y cefn, a meinweoedd ymylol megis y galon, pibellau gwaed, a llwybr gastroberfeddol.
Mae homoleg dilyniannau asid amino rhwng y ddau dderbynnydd yn cyrraedd 70%, ond mae gwahaniaethau mewn penodoldeb rhwymo ligand: mae gan CRF ₁ R affinedd uwch ar gyfer CRF na CRF ₂ R, sy'n tueddu i rwymo i ligandau teulu Urocortin (UCN).

Ar ôl rhwymo'r derbynnydd, mae CRF yn hyrwyddo gweithgaredd adenylate cyclase (AC) trwy actifadu protein G s, gan arwain at gynnydd mewn lefelau adenosine monophosphate (cAMP) mewngellol, sydd yn ei dro yn actifadu protein kinase A (PKA) a moleciwlau signalau i lawr yr afon fel CREB. Yn ogystal, gall CRF actifadu ffosffolipase C (PLC) trwy brotein G q, gan ysgogi symudiad ïon calsiwm (Ca ² ⁺) a phrotein kinase C (PKC) actifadu.
Y nodau signal allweddol yw
Llwybr CAMP PKA: yn rheoleiddio secretiad ACTH, metaboledd glwcos, a mynegiant genynnau.
Ca ² ⁺ - llwybr PKC: ymwneud â rheoleiddio cyffroedd niwronaidd a phlastigrwydd synaptig.
Llwybr MAPK: cyfryngu ymatebion addasol tymor hir (fel goroesiad niwronau) trwy ffosfforyleiddiad ERK1/2.

Gall amlygiad hirdymor i CRF arwain at ddadsensiteiddio derbynyddion, a amlygir fel effeithlonrwydd cyplu protein G gostyngol a ffosfforyleiddiad derbynnydd. Mae desensitization CRF ₁ R yn dibynnu'n bennaf ar - endocytosis cyfryngol arestin, tra bod effeithlonrwydd endocytosis CRF ₂ R yn gymharol isel, a all fod yn gysylltiedig â gwahaniaethau mewn lleoleiddio isgellog derbynyddion. Ar ôl endocytosis, gellir ailgylchu derbynyddion i'r gellbilen neu fynd i mewn i lysosomau i'w diraddio, sy'n hanfodol ar gyfer cynnal cartrefostasis swyddogaethol y derbynnydd.